DNA定序在生物化學教科書是醫學生修生化時從未理解的片段，即使許多生物醫學領域的博士畢業生也未必能讀懂。
DNA合成的反應如下圖：
上圖Primer在細胞中是一段10-12個鹼基的RNA，但DNA定序所使用的Primer是一段長約20個鹼基的DNA，依照上圖DNA Template 3’-end的DNA序列來設計DNA合成所需的5'-pirmer。因此，欲定序的一段DNA，其中一股3’-end的序列必須是已知的，否則就要用人為的方式在一端加上一段已知的DNA序列。
DNA與RNA的差別在Nucleotide上的核糖，如下圖：
上圖左側核醣(Ribose)-OH經由Ribonucleotide reductase(RNR)轉變成-H，即去氧核醣(Deoxyribose)。NTP用來合成RNA，dNTP用來合成DNA。
DNA的合成反應如下圖：
只要把上圖中藍色的dNTP變成ddNTP(如下圖)，即去氧核糖再缺少一個「-OH」。ddNTP崁入後，DNA的合成就會中止。如果是ddATP，中止的地方便是「A」，如果是ddCTP，中止的地方便是「C」。
DNA定序原理很簡單，只要在DNA合成反應中加入少量的ddNTP(dNTP的十分之一或更少)，DNA合成過程中便會隨機被少量的ddNTP中止，崁進ddATP就在Template DNA的A中止，崁進ddTTP就在T中止，崁進ddCTP就在C中止，崁進ddGTP就在G中止。
傳統(約1995年以前)用具有放射性的35S-dCTP參與DNA定序反應來標示DNA合成，分為G、T、A、C四個反應試管，每個試管中的Reaction mixture含有
1. DNA template (約2 ug先在95℃把雙股DNA開，然後放在冰上)
2. Primer (0.5-1 uM)
3. dNTP (即dATP + dTTP + dCTP + dGTP，各0.2 mM)
4. 35S-dCTP (每管加0.5 uL)
5. DNA polymerase (每管加0.5 uL)
6. 10x Buffer (1 ul)
以上設計成9 ul
試管 G：9 ul Reaction mixture + 1 ul ddGTP (final 20 uM)
試管 T：9 ul Reaction mixture + 1 ul ddTTP (final 20 uM)
試管 A：9 ul Reaction mixture + 1 ul ddATP (final 20 uM)
試管 C：9 ul Reaction mixture + 1 ul ddCTP (final 20 uM)
Sequencing reaction在37℃，5分鐘即完成，然後加入Loading dye(裡面含有EDTA及Formamide，EDTA可與Mg+結合，中止反應；Formamide可防止已合成的35S-DNA加熱至65℃後再與Template形成雙股)，合成的單股35S-labeled DNA跑8-10% Polyacrylamid gel即可得到下面的結果：
1990年以後，綠、紅、黃、藍的螢光化物被應用在DNA sequencing，即把ddNTP用綠(ddATP)、紅(ddTTP)、黃(ddGTP)、藍(ddCTP)四種螢光化物標示，Sequencing reaction只需做一管，裡面含有：
1. DNA template (約2 ug先在95℃把雙股DNA開，然後放在冰上)
2. Primer (0.5-1 uM)
3. dNTP (即dATP + dTTP + dCTP + dGTP，各0.2 mM)
4. 20 uM 綠-ddATP、紅-ddTTP、黃-ddGTP、藍-ddCTP
5. DNA polymerase (0.5 uL)
6. 10x Buffer (1 ul)
Total 10 ul，反應5分鐘後即可加入Loading dye跑Polyacrylamide gel，結果如下圖：
現在實驗室做生醫研究的DNA sequencing都是送給廠商做，拿到的結果如下圖3：
https://www.sigmaaldrich.com/TW/en/technical-documents/protocol/genomics/sequencing/sanger-sequencing
http://www.genetinfo.com/trend/item/63412.html
失智失能取消共照服務 https://health.udn.com/health/story/120650/6669182
Retracted coronavirus (COVID-19) papers “We’ve been tracking retractions of papers about COVID-19 as part of our database. Here’s a running list, which will be updated as needed.” https://retractionwatch.com/retracted-coronavirus-covid-19-papers/ On the Retracted list is a once popular Sweden study: #209 “SARS–CoV–2 Spike Impairs DNA Damage Repair and Inhibits V(D)J Recombination In Vitro,” published in Viruses on October 13, 2021. Also on the lists are 12 studies involving “ivermectin”.
要嘛? 大幅提高保費! 否則, 刪減醫療支出!
請教版主清冠一號有治療新冠病毒的效果嗎?
清冠一號無法改變天擇，T cell immunity才能克服 "被天擇"。
COVID-19 Vaccine Boosters for Young Adults: A Risk-Benefit Assessment and Five Ethical Arguments against Mandates at Universities https://papers.ssrn.com/sol3/papers.cfm?abstract_id=4206070 ‘Unethical’ and Up to 98 Times Worse Than the Disease: Top Scientists Publish Paradigm-Shifting Study About COVID-19 Boosters for Young Adults https://www.theepochtimes.com/unethical-and-up-to-98-times-worse-than-the-disease-top-scientists-publish-paradigm-shifting-study-about-covid-19-vaccines_4723122.html https://t.me/drpalevsky/1668
Florida Surgeon General released an analysis on mRNA vaccines that shows an increased risk of cardiac related death among men 18-39, saying “We will not be silent on the truth.” Twitter already deleted the post https://t.me/scifiworld0/3527 California just became the first state in the nation to mandate that all children take mRNA vaccines in order to attend school. Florida, on the other hand, now recommends against the mRNA vaccines for males ages 18-39 years old. Florida follows the science, California does not. https://t.me/AmericasFrontlineDoctors/939
政客政治醫師就只學洗腦話術, 亂做實驗就是專業
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謝ˋ謝 李醫師答覆, 感恩
請問教授我於昨晚身體不適發燒 趕緊服用N+E後 並沒有喉嚨方面的問題 反而是肚子和胃部疼痛 也噁心想吐 也一直想上大號 （但沒有成功） 這是否說明病毒已進入腸胃 我仍按照指示服完3天的藥即可 需要再加表飛鳴之類的嗎 謝謝您的回覆
你要去做檢查，照腹部X光、抽血、做超音波，也許是結腸憩室炎、膽囊發炎 或 闌尾炎，不是病毒感染。
請問教授：如果是因為2支AZ疫苗造成的傷害，導致食慾大開，這一年內已胖近10公斤，原本沒有脂肪肝的，現在變中度脂肪肝，還能透過不斷運動恢復體重及脂肪肝問題嗎？ 還是破壞大於運動減重，覆水難收了？
體重增加可經由運動與飲食來恢復。你該擔心的不是體重增加，而是疫苗已促使你的血管壁及全身器官累積PrLP aggregate--->Amyloid。
類澱粉沉積難道完全無法被分解或改善嗎?還是因為會持續不斷累積，累積的量大於能分解掉的量，最後勢必造成重要器官衰竭呢？ 謝謝您的指導~
類澱粉沉積完全無法被分解或改善，且會持續不斷擴大累積，最後勢必造成重要器官衰竭。
好奇請問版主今年癌症患者就醫人數有明顯變多嗎？
美國自2021年1月開始注射mRNA疫苗，2021年癌症病(1,898,160)例較2020年(1,806,590)增加5%，2022年估計在2,000,000。 https://abcnews.go.com/Health/million-cases-cancer-diagnosed-2022-report/story?id=82204749 2020 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31912902/ 2021 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33433946/
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